1、配制方法:量取下列溶液于500ml烧杯中1M Tris-HCl Buffer PH=8.0 5ml0.5M EDTA PH=8.0 1ml向烧杯中加入约400mldd H2O均匀混合;将溶液定容到500ml后,高温高压灭菌;室温保存.1×TE Buffer组成浓度:10mMTris-HCl1mM EDTA PH=8.0配制量:500ml扩展资料TE缓冲溶液(Tris-EDTA buffer solution)在生化研究工作中,常常要用到缓冲溶液来维持实验体系的酸碱度。
2、研究工作的溶液体系pH值的变化往往直接影响到我们工作的成效。
3、如果提取酶实验体系的pH值变化或变化过大,会使酶活性下降甚至完全失活。
【资料图】
4、所以我们要学会配制缓冲溶液。
5、由弱酸及其盐组合一起使具有缓冲作用。
6、生化实验室常常用的缓冲系主要有磷酸、柠檬酸、碳酸、醋酸、巴比妥酸、Tris(三羟甲基氨基甲烷)等系统,在生化实验或研究工作中要慎重地选择缓冲体系,因为有时影响实验结果的因素并不是缓冲液的pH值,而是缓冲液中的某种离子。
7、如硼酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐和三羟甲基甲烷等缓冲剂都可能产生不需要的反应。
8、硼酸盐:硼酸盐与许多化合物形成复盐、如蔗糖。
9、柠檬酸盐:柠檬酸盐离子容易与钙结合,所以存在有钙离子的情况下不能使用。
10、磷酸盐:在有些实验,它是酶的抑止剂或甚至是一个代谢物,重金属易以磷酸盐的形式从溶液中沉淀出来。
11、而且它在pH7.5以上时缓冲能力很小。
12、三羟甲基氨基甲烷:它可以和重金属一起作用,但在有些系统中也起抑止的作用。
13、其主要缺点时温度效应。
14、这点往往被忽视,在室温pH是7.8的Tris一缓冲液,在4℃时是8.4,在37℃时是7.4,因此,4℃配制的缓冲液拿到37℃测量时,其氢离子浓度就增加了10倍。
15、而且它在pH7.5以下,缓冲能力差。
16、参考资料:TE缓冲液的百度百科 10 mmol/L Tris-HCl(pH 8.0) 1 mmol/L EDTA(pH 8.0) 因为含有以上两种物质,所以称为TE。
17、 配制分三步: 1) 1 M Tris-HCl (pH 8.0) 50 ml的配制:称取Tris碱6.06 g,加超纯水40 ml溶解,滴加浓HCl约2.1 ml调pH至8.0,定容至50 ml。
18、 2) 0.5 M EDTA(pH 8.0)50 ml的配制:称取EDTA-Na2·2H2O 9.306 g,加超纯水35 ml,剧烈搅拌,用约1 g NaOH颗粒调pH至8.0,定容至50 ml。
19、(EDTA二钠盐需加入NaOH将pH调至接近8.0时,才会溶解。
20、) 3) 1×TE(10 mM Tris-HCl,pH 8.0;1 mM EDTA,pH 8.0)的配制: 作用: TE缓冲液是弱碱性,对DNA的碱基有保护性,(DNA在它是的稳定性较好,不易破坏其完整性或产生开环及断裂),包括提取好的DNA也要放在TE缓冲液是保存. 10mMTris-Hcl,pH有7.47.68.0三种。
21、 EDTA调到8.0是为了更好溶解,其他只要调到相应pH就可以。
22、Tris在7-8附近缓冲能力很强,所以加8.0的EDTA下去后,不会改变pH。
23、TE缓冲液配方(10倍,PH8.0) 100mmol/L的Tris-Hcl(PH值8.0)和10mmol/L的EDTA(PH值8.0)混合分装后高压灭菌,室温保存。
24、 注解:指的是二者在缓冲液里的最终浓度。
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